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蜱傳腦炎病毒lgG抗體檢測(cè)試劑盒：蜱傳腦炎是一種急性病毒感染，以快速病變?yōu)樘卣鳎腥竞蠼】禒顟B(tài)迅速惡化產(chǎn)生疾病，包括嚴(yán)重的關(guān)節(jié)痛和發(fā)燒。體溫會(huì)突然上升，可高達(dá)40℃，并伴有寒戰(zhàn)。幾天后，發(fā)燒癥狀減弱，繼而復(fù)發(fā)，這樣周而復(fù)始的類似鞍狀峰狀曲線 體溫。
更新時(shí)間：2025-01-03
蜱傳腦炎病毒lgG抗體檢測(cè)試劑盒
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：蜱傳腦炎病毒lgG檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名稱：Chikungunya IgG micro-capture ELISA
【產(chǎn)品規(guī)格】
96T
【預(yù)期用途】
試劑盒可用于人血清和血漿（檸檬酸鹽）中蜱傳腦炎病毒lgG抗體的定性檢測(cè)。
【前言簡(jiǎn)介】
蜱傳腦炎病毒是一種屬于披膜病毒科甲病毒屬的節(jié)肢動(dòng)物媒介病毒。披膜病毒科甲病毒屬（α-病毒屬）至少有24種不同的種屬。它們是一類脂質(zhì)圍繞的病毒體，直徑約為50-60nm。
α-病毒感染初是由感染的蚊子叮咬引起的，感染后，病毒借機(jī)進(jìn)入皮下和皮膚組織。1至12天，演變?yōu)?/span>蜱傳腦炎。
蜱傳腦炎是一種急性病毒感染，以快速病變?yōu)樘卣?，感染后健康狀態(tài)迅速惡化產(chǎn)生疾病，包括嚴(yán)重的關(guān)節(jié)痛和發(fā)燒。
體溫會(huì)突然上升，可高達(dá)40℃，并伴有寒戰(zhàn)。幾天后，發(fā)燒癥狀減弱，繼而復(fù)發(fā)，這樣周而復(fù)始的類似鞍狀峰狀曲線 體溫。關(guān)節(jié)痛主要表現(xiàn)在多關(guān)節(jié)，主要累及小關(guān)節(jié)區(qū)域的嚴(yán)重受損，隨運(yùn)動(dòng)增加，疼痛加劇?；颊咄ǔ?yīng)避免移動(dòng)。關(guān)節(jié)會(huì)腫脹，但無明顯關(guān)節(jié)液體積聚。這類癥狀持續(xù)1周至數(shù)月并伴隨有肌痛。病發(fā)一天會(huì)出現(xiàn)皮疹，但也有延遲出現(xiàn)的，然后皮疹漫延至臉部，頸部，演變?yōu)榘哒?、丘疹或紫?,疹間皮膚多為正常 ,伴有瘙癢感，繼而軀干、四肢的伸展側(cè)、手掌和足底出現(xiàn)皮疹。也能觀察到瘀斑皮膚受損。頭痛，畏光，有明顯咽炎，惡心，嘔吐的咽喉痛也是病發(fā)可能出現(xiàn)的癥狀。很多情況下，關(guān)節(jié)痛和多發(fā)性關(guān)節(jié)炎會(huì)持續(xù)數(shù)月仍至數(shù)年，常伴有關(guān)節(jié)受損，更有罕見者，出現(xiàn)包括腦炎，高致命性腦膜腦炎的后遺癥。
這類病毒在非洲和亞洲為高發(fā)區(qū)。20%至90%熱帶和亞熱區(qū)人群發(fā)現(xiàn)有感染的血清學(xué)證據(jù)。由于伊蚊在北非和南美急劇橫行，這些地帶的人群對(duì)病毒都有易感性，因此造成爆發(fā)疫情的可能性。中歐人群的感染主要是因?yàn)橐恍┰竭^熱帶和亞熱帶的旅行者攜帶蜱傳腦炎病毒而傳染的。
種屬 | 疾病 | 癥狀 | 感染機(jī)制 |
蜱傳腦炎病毒 （α-病毒） | 蜱傳腦炎 | 發(fā)燒 皮疹 關(guān)節(jié)痛 持續(xù)關(guān)節(jié)痛和 多發(fā)性關(guān)節(jié)炎，有時(shí)有關(guān)節(jié)受損 更有罕見者，出現(xiàn) 腦炎和腦膜腦炎 | 由蚊蟲叮咬
白紋伊蚊（非洲） 埃及伊蚊（非洲，亞洲） |
病毒感染可由以下方法鑒別
• 血清學(xué)： 免疫熒光、酶免法檢測(cè)相應(yīng)的抗體
【檢測(cè)原理】
試劑盒采用酶聯(lián)免疫法。微孔中預(yù)包被有抗人IgG，用于結(jié)合樣品中相應(yīng)的抗體。洗板后，去除非結(jié)合的樣品。再加入蜱傳腦炎抗原液，再次洗板后，再加入生物素化的蜱傳腦炎抗體。加入鏈霉親和素標(biāo)記結(jié)合物（酶聯(lián)物），與固相的特異性的蜱傳腦炎復(fù)合物結(jié)合。加入TMB底物液后，微孔中顯藍(lán)色。顯色的強(qiáng)度與病人樣品中蜱傳腦炎病毒lgG抗體的量成正比。加入終止液終止酶反應(yīng)，形成黃色終點(diǎn)產(chǎn)物。后在酶標(biāo)儀處450 nm讀數(shù)。
【試劑盒組成成分】
微孔板 12×8
包被有抗人IgG
樣品稀釋液 1×100 mL
即用型、pH7.2±0.2、黃色、白蓋
洗滌液 1×50ml
20倍濃縮、pH7.2±0.2、白蓋
蜱傳腦炎抗原液 6瓶
凍干品、紅蓋
蜱傳腦炎抗體液 1×6ml
含生物素化蜱傳腦炎抗體、即用型、藍(lán)色、白蓋
鏈霉親和素酶聯(lián)物 1×6ml
含鏈霉親和素標(biāo)記的HRP、即用型、紅色、黑蓋
終止液 1×15ml
即用型、含硫酸、濃度0.2mol/L、紅蓋
底物液 1×15ml
即用型、黃蓋
陽性質(zhì)控 1×1.5ml
即用型、黃色、紅蓋
臨界質(zhì)控 1×2ml
即用型、黃色、綠蓋
陰性質(zhì)控 1×1.5ml
即用型、黃色、藍(lán)蓋
封板紙
支架
所需材料（未提供）
·酶標(biāo)儀（450/620 nm）
·恒溫箱（37 ℃）
·洗瓶或自動(dòng)洗板機(jī)
·移液管（規(guī)格10和1000 µL）
·震蕩器
·去離子水或蒸餾水
·一次性試管
·計(jì)時(shí)器
【儲(chǔ)存條件】
試劑盒存于2~8℃，能穩(wěn)定保存至有效期，有效期見標(biāo)簽 。
【樣品要求】
試驗(yàn)采用人血清或血漿（檸檬酸鹽）。收集的樣品在2~8℃可保存5天。更長(zhǎng)時(shí)間，分成小份，凍存于（-20~-70℃）。 凍存樣品，試驗(yàn)前應(yīng)*解凍。避免反復(fù)凍融。
不建議使用熱滅活樣品
樣品稀釋
試驗(yàn)前樣品應(yīng)稀釋：1個(gè)單位的樣品+100個(gè)單位的樣品稀釋液，如10µL樣品+1mL樣品稀釋液，在試管中旋渦搖勻。
【檢測(cè)方法】
試劑準(zhǔn)備
試驗(yàn)前，將所有試劑，樣品，質(zhì)控品平衡至室溫(20~25℃)
蜱傳腦炎抗原：
每瓶加入1mL稀釋洗滌液溶解，緩慢加入，室溫下靜置溫育15min，制成即用型抗原液。此抗原液在2~8 ℃可穩(wěn)定保存1天。
洗滌液：
1個(gè)單位的濃縮洗滌液+19個(gè)單位的雙蒸水。
如：10mL濃縮洗滌液+190 mL雙蒸水。稀釋洗滌液在室溫下能穩(wěn)定保存5天。開瓶后，濃縮的洗滌液在2~8℃可穩(wěn)定保存至有效期.
檢測(cè)步驟
試驗(yàn)前，仔細(xì)閱讀說明書。嚴(yán)格執(zhí)行說明書要求才能得到優(yōu)良結(jié)果。如試驗(yàn)使用自動(dòng)洗板機(jī)，建議每孔350µL，洗板5次（如手工洗，則每孔300µL，洗板3次）。試驗(yàn)前，確定好樣品，質(zhì)控品的加樣布局方案。取所需板條置于板架上。
至少設(shè)
1孔（如A1） 空白對(duì)照
1孔 (如B1) 陰性質(zhì)控
2孔 (如C1+D1） 臨界質(zhì)控
1孔（如E1） 陽性質(zhì)控
如覺得有必要，建議樣品和質(zhì)控品都作雙份檢測(cè)。
試驗(yàn)應(yīng)按同樣的加樣順序加取試劑，避免不同的時(shí)間間隔造成誤差。
使用新的一次性加樣槍頭，加各質(zhì)控品，樣品
調(diào)節(jié)恒溫箱為37±1℃
注意：洗滌步驟很關(guān)鍵。不充分的洗板，會(huì)導(dǎo)致不精確或錯(cuò)誤上升的吸光度值。
藍(lán)色溶液在孵育過程中變?yōu)辄S色。
注意：強(qiáng)陽性樣品會(huì)導(dǎo)致色原產(chǎn)生沉淀，沉淀的產(chǎn)生會(huì)對(duì)讀數(shù)產(chǎn)生影響。所以先用陰性基質(zhì)進(jìn)行預(yù)稀釋，建議1：1的比例稀釋，然后，再1個(gè)單位的預(yù)稀釋樣品+100個(gè)單位的樣品稀釋液。終結(jié)果（以U計(jì)算）乘以預(yù)稀釋因子2即可
【結(jié)果計(jì)算】
用A1空白對(duì)照孔對(duì)酶標(biāo)儀進(jìn)行調(diào)零
如遇技術(shù)問題，酶標(biāo)儀不能調(diào)零。 所測(cè)樣品的吸光度值減去空白對(duì)照的讀數(shù)值，
即可得到較可靠的讀數(shù)。
在酶標(biāo)儀處450 nm處測(cè)讀所有質(zhì)控品和樣品的吸光度值。620 nm作為參考波長(zhǎng)。
如進(jìn)行雙孔檢測(cè)，計(jì)算吸光度均值。
實(shí)驗(yàn)有效性標(biāo)準(zhǔn)
如試驗(yàn)有效，必須滿足以下要求
·空白對(duì)照（A1）： 吸光度值< 0.100
·陰性質(zhì)控（B1）： 吸光度值< 臨界讀數(shù)
·臨界質(zhì)控（C1+D1） 吸光度值 0.150~1.300
·陽性質(zhì)控（E1） 吸光度值> 臨界讀數(shù)
如上述標(biāo)準(zhǔn)沒滿足，試驗(yàn)視為無效，試驗(yàn)應(yīng)重測(cè)。
結(jié)果計(jì)算
臨界讀數(shù)是雙孔臨界質(zhì)控的吸光度均值
示范： 臨界吸光度值0.39 +臨界吸光度值0.37＝0.76 / 2 = 0.38
即吸光度值＝0.38
結(jié)果分析說明
樣品吸光度值高于臨界讀數(shù)的10 %視為陽性結(jié)果。
樣品吸光度值在臨界讀數(shù)的±10 %范圍內(nèi)視為灰色可疑區(qū)
建議2－4周后，重新取新鮮的樣品進(jìn)行試驗(yàn)。如試驗(yàn)結(jié)果仍為灰色可疑區(qū)，視
為陰性結(jié)果
樣品吸光度值低于臨界讀數(shù)的10%視為陰性結(jié)果
結(jié)果以U表示
病人吸光度均值×10
--――――――― ＝ [Units=U]
臨界指數(shù)
示范： 1.216×10
------------- =32 U（Units）
0.38
臨界： 10 U
灰區(qū)： 9-11 U
陰性： <9 U
陽性： >11 U
【注意事項(xiàng)】
操作注意事項(xiàng)
1. 樣品的不合理處理及實(shí)驗(yàn)操作的任何改動(dòng)都將影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。取樣體積、溫育時(shí)間、預(yù)處理步驟都必須嚴(yán)格按說明進(jìn)行。只能使用標(biāo)準(zhǔn)取樣器和標(biāo)準(zhǔn)設(shè)備。
2. 一旦實(shí)驗(yàn)開始，所有的步驟都必須完整的進(jìn)行下去，不允許中斷。在使用前，將所有試劑和樣品都平衡至室溫（18-25℃），輕輕搖動(dòng)液體試劑和樣品，試劑混合過程中要避免氣泡。
3. 避免污染試劑、取樣器、微孔/試管。加試劑和樣本時(shí)，請(qǐng)使用新的取樣吸頭。不要交換瓶蓋。蓋好不使用的試劑。不要重復(fù)使用微孔/試管或者試劑。
4. 用定標(biāo)儀對(duì)反應(yīng)板進(jìn)行校準(zhǔn)。
5. 溫育時(shí)間會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。微孔加樣的順序和時(shí)間都必須*。建議使用8孔微量取樣器給微孔加樣。
6. 微量板的清洗非常重要，微孔清洗不好將會(huì)形成錯(cuò)誤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。建議使用多孔取樣器或自動(dòng)微孔清洗設(shè)備進(jìn)行清洗。每次溫育間隔期間要避免微孔干燥。加洗滌液和吸液時(shí)要避免碰到包被孔。清洗和加試劑時(shí)都應(yīng)特別小心。清洗時(shí)，在微孔中精確的加入洗滌液緩沖液，同時(shí)確保微孔中無殘?jiān)?/span>
7. 濕度會(huì)影響包被板，所以在未到達(dá)室溫時(shí)請(qǐng)勿打開包裝，未使用的包被板要重新密封于裝有干燥劑的包裝袋中。
蜱傳腦炎病毒lgG抗體檢測(cè)試劑盒
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